在构图上，达·芬奇改变了以往画肖像画时采用侧面半身或截至胸部的习惯，代之以正面的半身像构图，透视点略微上升，蒙娜丽莎双手交握，平行于画面底边，胳膊肘处在画面的两角，人的整个姿态形成金字塔构图。拉斐尔等人都曾模仿过这种构图。当然这在今天也仍有借鉴意义。
坐姿时，可以让模特把手放在椅子把手上；站立时，让模特手捧一束花，稍微侧立都可以有效地形成金字塔构图。另外让人物会尽可能地填满画框，避免过多背景分散观者注意力。
还有一个不能忽略的元素是，达·芬奇把蒙娜丽莎的眼睛安排在和观者平视的角度。这样，观众就会觉得是在直视蒙娜丽莎，而不是我们在仰视她或她在仰视我们。
